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嬰幼兒食品和乳品中乳清蛋白的測定

2022-06-20

乳清蛋白是采用先進工藝從牛奶中分離提取出來的珍貴蛋白質(zhì),以其具有高生物價、高消化率、高蛋白質(zhì)功效比和高利用率等優(yōu)點,被譽為“蛋白之wang”,是公認的人體優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)補充劑之一。其含量的高低決定了嬰幼兒奶粉的品質(zhì),相關(guān)國標通過酸水解以后的氨基酸來評價乳清蛋白的含量,月旭科技推出的檢測方法檢測更加快捷可靠。

樣品前處理

稱取0.1g試樣(含蛋白質(zhì)7.5mg-25mg的樣品),于水解管中,在冰水浴中冷卻 30min后加入2mL已經(jīng)冷卻的過甲酸溶液,蓋好瓶塞后置于0℃±1℃冰箱中,冰浴16h。向各水解管中加入0.3mL氫溴酸,振搖后冰浴 30min,在60℃±2℃氮吹儀上濃縮至干。向水解管內(nèi)加入6moL/L鹽酸10mL,沖入氮氣1min 后,擰緊螺絲蓋,將水解管放在110℃±1℃的恒溫干燥箱內(nèi)水解24h后取出冷卻至室溫。將水解液用超純水轉(zhuǎn)移并定容至25mL容量瓶中,混勻,濾紙過濾。吸取濾液1mL于60℃±2℃氮吹儀上濃縮至干,殘留物用1mL超純水溶解,待衍生。

標準品溶液

用超純水配置磺基丙氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸標準品溶液1μmoL/mL,待衍生。

衍生方法

分別將月旭科技氨基酸衍生方法包中 A、B兩種衍生試劑用稀釋劑稀釋至原來濃度的 1/5;精密量取混標溶液及樣品溶液各160μL,加入稀釋后的衍生溶液 A、B 各100μL,混勻,室溫反應(yīng)60min;然后加入正己烷溶液 400μL,旋緊蓋子后振搖10s,室溫靜置分層,取下層液200μL,加入800μL水中,混勻;再移取200μL加入到800μL水中,混勻,用0.45μm 有機濾膜過濾,即得。

色譜條件

色譜柱:月旭Ultimate? AQ-C18(4.6×250mm,3μm)。

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柱溫:40℃;

紫外檢測器:254nm;  

流速:1.0mL/min;  

進樣量:5μL。

譜圖和數(shù)據(jù)

1. 磺基丙氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸標準品溶液1μmoL/mL。

微信截圖_20220620165505.png

2. 樣品水解

微信截圖_20220620165535.png

結(jié)論

用月旭Ultimate? AQ-C18(4.6×250mm,3μm)色譜柱,在該色譜條件下測定,能滿足實驗需求。

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